摘要

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2025 α-突触核蛋白实验室检测方法专家共识.pdf

帕金森病以中脑黑质的多巴胺能神经元变性及路易体形成为特征。临床主要表现为静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势平衡障碍等运动症状及自主神经功能障碍、睡眠障碍和神经精神症状等非运动症状。α-突触核蛋白（α-synuclein，α-Syn）作为路易体的主要成分，其病理性聚集在疾病发生、发展的过程中起关键作用。然而，尽管多巴胺能神经元内路易体沉积为帕金森病诊断的金标准，但临床医师难以实施脑组织活检，亟须研发可替代脑组织活检的颅外组织或体液的病理性α-Syn检测技术以破解疾病的诊断难题。

外周组织或体液病理性α-Syn检测方法学概况

病理条件下，α-Syn发生空间构象改变，具备聚集倾向和朊蛋白样种子活性，可诱导生理性α-Syn单体聚集，这一过程称为α-Syn种子活性，是α-Syn致病的核心机制。

据报道，α-Syn聚集体不仅沉积于中枢，也可传播并沉积于外周组织。因此，检测外周组织或体液的病理性α-Syn成为可替代脑组织活检的帕金森病诊断的重要辅助手段。文献报道，在帕金森病患者的脑脊液、血液、皮肤、唾液、唾液腺、口腔黏膜和嗅黏膜等体液和外周组织中，均可检出α-Syn的不同形式，包括总α-Syn（total alpha-synuclein，t-α-Syn）、磷酸化α-Syn（phosphorylated α-synuclein，p-α-Syn）、寡聚态α-Syn及错误折叠的种子活性的α-Syn。

国际上近期也有研究者提出两种帕金森病诊断和分期模型，将病理性α-Syn检测、神经影像和致病基因筛查等作为临床高度疑似帕金森病患者的辅助诊断手段，帕金森病诊断模式呈现出从传统的临床症候学向客观生物学标志物验证转变的趋势。其中，皮肤p-α-Syn及皮肤和脑脊液α-Syn种子活性，可高灵敏度和高特异度地识别病理性α-Syn，具备微创、可重复和便于推广的特点，将纳入帕金森病研究性诊断的关键指标体系。为此，为明确不同检测方法的临床适用性，本共识将对当前主要用于检测病理性α-Syn的几种方法进行分类介绍。

1、总α-Syn：ELISA常用于定量分析生物样本的t-α-Syn含量，而非检测病理性α-Syn错误折叠体。该方法虽可行半定量分析，但检测结果的准确性受抗原选择、抗体特异性及待测样本的α-Syn靶标浓度等因素的影响，临床应用受限。研究结果显示，帕金森病患者的脑脊液t-α-Syn含量不同于健康志愿者或其他神经退行性疾病患者，但不同文献报道的检测结果差异较大，尤其是帕金森病患者与健康志愿者的检测结果存在较大范围重叠，导致t-α-Syn的临床意义受限。

2、血浆外泌体的神经源性α-Syn：可能有助于区分特发性快速眼动睡眠行为障碍（iRBD）患者与健康人群（曲线下面积为0.91），或前驱期帕金森病高风险与低风险者（曲线下面积为0.80）。

3、α-Syn SAA：基本原理是以患者组织或体液样本中极微量的α-Syn聚集体作为模板，诱导外源添加的重组α-Syn底物（单体）在特定的物理处理模式（震荡或超声破碎）中聚集，从而实现病理性α-Syn指数级扩增与皮克级灵敏检测。

目前，α-Syn SAA主要包括3种技术形式：蛋白质错误折叠循环扩增（PMCA）、RT-QuIC、静态种子扩增法（QSAA）。PMCA通过超声循环剪切纤维以维持扩增循环，检测灵敏度高但实验操作复杂。RT-QuIC通过恒定震荡驱动α-Syn聚集反应，结合荧光探针实现该蛋白聚集过程中的实时监测，兼具高灵敏度与良好的可标准化潜力。QSAA则在静态模式中扩增，操作简便，适用于检测定位组织样本中的错误折叠蛋白。尽管三者在检测方式和孵育条件上有所不同，但均基于“种子诱导扩增”这一共同聚集机制，能够放大病理性α-Syn聚集体信号，在神经退行性疾病的辅助诊断中展现高灵敏度和特异度。

α-Syn的实验室检测方法推荐

推荐说明：依据汇总的数据，用α-Syn SAA区分帕金森病与健康对照组或非神经退行性疾病时，脑脊液检测的灵敏度为91%，特异度为95%；皮肤样本的灵敏度为91%，特异度为92%。因此，在临床高度疑诊帕金森病或其他突触核蛋白病的患者中，结合临床表征，皮肤或脑脊液的α-Syn SAA的结果均可作为帕金森病诊断的重要参考。

具体建议如下：

（1）条件允许时，优先考虑高灵敏度的皮肤或脑脊液α-Syn SAA；

（2）若检测方法为ELISA或IHC，建议对检测结果为阴性的样本进行SAA验证，或结合临床和其他辅助诊断结果进行综合判定；

（3）对SAA阴性的疑似帕金森病患者，建议参考基因检测（如 GBA、LRRK2突变）及影像学检查，结合临床特征及随访数据排除非突触核蛋白病并指导后续管理。

为进一步提高α-Syn SAA的准确性并减少结果的异质性，建议在皮肤活检的样品处理方面加强标准化。具体措施包括：选择靠近头部的后颈部皮肤作为活检部位；活检深度须达到真皮与皮下组织交界区，以确保生物样本包含完整的组织层次；样本应在低温条件下（建议-80 ℃）尽快保存，并避免反复冻融，以防止α-Syn种子活性丧失。这些措施有助于优化α-Syn SAA的灵敏度与一致性，从而为临床诊断提供更可靠的依据。

推荐意见2：皮肤活检p-α-Syn检测具较高的帕金森病诊断效能，与皮肤和脑脊液SAA诊断效能相当，且具有较高重复性，推荐用于疑诊帕金森病患者的重要辅助诊断（推荐强度：Ⅱ级；证据级别：2a）。

推荐说明：多家皮肤活检中心报告，免疫荧光法可检测帕金森病患者皮肤神经末梢中特异性p-α-Syn沉积，显示免疫荧光与皮肤或脑脊液SAA对帕金森病的诊断效能相当，但不同报道中该项目检测结果的异质性较高，可能与取样部位、方法的灵敏度、样本量及处理方式有关，临床实际应用受限。因此，在临床高度疑诊帕金森病或其他突触核蛋白病的前提下，结合临床表征，皮肤活检发现p-α-Syn可作为帕金森病诊断的重要参考。

推荐意见3：血液样本α-Syn SAA采集便捷、操作简单，成为帕金森病病理性标志物探究的重点，特别是血清样本α-Syn SAA可推荐作为疑诊帕金森病患者的重要辅助诊断依据（推荐强度：Ⅲ级；证据级别：3）。

推荐说明：文献报道，在80%~90%的帕金森病患者血液样本中可检出病理性α-Syn聚集体，但约10%健康人群也可呈阳性。血清优化型α-Syn SAA是一种新型检测技术，将血清中α-突触核蛋白种子活性的检测灵敏度提高至 80.39%，特异度提高至 92.43%，其临床应用价值仍有待全国多中心研究加以双盲验证。

推荐意见4：口腔黏膜SAA适用于无创筛查；对于不能进行皮肤和脑脊液样本采集者，也可考虑口腔黏膜SAA（推荐强度：Ⅲ级；证据级别：3）。

推荐说明：口腔黏膜α-Syn SAA因无创性采样、操作便捷的特点，适合作为疾病的筛查手段。文献报道，67.3%的帕金森病患者及63.6%的iRBD患者的口腔黏膜样本中可检出病理性α-Syn，而健康人群口腔黏膜检出α-Syn聚集体的阳性率约9.7%。虽然该方法可特异性识别口腔黏膜的病理性α-Syn种子活性（特异度90.3%），但仍须进一步优化采样技术及标准化检测流程以提升灵敏度。此外，尽管iRBD患者的α-Syn SAA阳性结果具有潜在的疾病预测价值，但须长期随访以验证其与突触核蛋白病转化的相关性。

推荐意见5：唾液和嗅黏膜样本的α-Syn SAA在帕金森病早期诊断中具备一定价值，但现阶段仍须结合临床表现综合评估（推荐强度：Ⅲ级；证据级别：3）。

推荐说明：唾液和嗅黏膜中α-Syn SAA的检测结果在帕金森病诊断中的特异度受多种因素影响，不同研究中的灵敏度和特异度差异较大。唾液检测的灵敏度为76.0%~83.78%，特异度为82.61%~94.4% ；嗅黏膜检测的灵敏度为51%（95% CI：39%~62%），特异度为91%（95% CI：84%~96%）。此外，泪液样本亦可检出α-Syn SAA阳性信号，但其灵敏度和特异度相对较低，缺乏大规模研究结果支持。因此，目前不建议单独依赖上述样本α-Syn水平诊断帕金森病。

推荐意见6：除脑脊液、皮肤、唾液、口腔黏膜、泪液、嗅黏膜和血液的病理性α-Syn SAA及皮肤α-Syn免疫组化检测已有一定研究依据外，其他生物样本及检测方法从实验室诊断方法学角度仍缺乏充分证据（推荐强度：Ⅰ级；证据级别：无）。

推荐意见7：临床检测为α-Syn阴性的帕金森病患者，建议将同一样本重复检测2~3次并比较3~5个稀释浓度复查。6~12个月或症状进展后进行帕金森病相关生物学标志物复测（推荐强度：Ⅰ级；证据级别：无）。

病理性α-Syn阴性

临床还存在各种检测方法均显示病理性α-Syn阴性的帕金森病患者，主要有以下原因。

1、患者外周组织特别是体液的α-Syn聚集体含量过低，无法达到当前检测方法的检测下限。

2、采样时间差异，在帕金森病病程及治疗的不同阶段，α-Syn聚集体含量存在有无和高低波动。

3、患者表现为其他病理性标志物。尽管α-Syn被广泛认为是关键的致病因素，但仍有部分患者在多种检测过程中仍未表现α-Syn聚集的病理学特征。

这类α-Syn阴性的帕金森病患者可能与特定基因突变密切相关，如LRRK2、PARK2（Parkin）、PINK1、DJ-1、ATP13A2和PLA2G6等，其突变通常见于早发性或家族性帕金森病，致病机制可能不完全依赖于α-Syn异常聚集，而是通过线粒体功能障碍、蛋白质降解系统异常或溶酶体失调等途径导致神经退行性变。脑组织病理学检查中，这些患者早期甚至中期缺乏典型路易小体。但最新研究结果显示，在α-Syn免疫组化检测阴性的LRRK2突变帕金森病患者中，脑组织α-Syn SAA可呈阳性，表明α-Syn SAA检测技术在评估该类患者时，具有重要的诊断参考价值。

参考文献

中华医学会神经病学分会帕金森病及运动障碍学组,中国医师协会神经病学分会帕金森病及运动障碍学组. α-突触核蛋白实验室检测方法专家共识（2025）[J]. 中华药械研究与临床,2025, 网络预发表.