学术资讯2025/3/51 次浏览
重症肌无力特异性抗体对改进诊断和治疗的意义
摘要 重症肌无力（MG）是一种自身免疫性疾病，其特征为骨骼肌无力和易疲劳。它是一种抗体介导的疾病，由针对神经肌肉接头蛋白的自身抗体所引发。在大多数患者（约85%）中可检测到AChR抗体，而在6%患者中可检测到MuSK抗体。在约10%的MG患者，使用针对AChR和MuSK抗体的传统检测方法无法检测到自身抗体，称之为血清阴性MG（SN-MG），因此改进已知抗体检测方法或发现新的抗原靶点势在必行。近年来…
摘要
重症肌无力（MG）是一种自身免疫性疾病，其特征为骨骼肌无力和易疲劳。它是一种抗体介导的疾病，由针对神经肌肉接头蛋白的自身抗体所引发。在大多数患者（约85%）中可检测到AChR抗体，而在6%患者中可检测到MuSK抗体。在约10%的MG患者，使用针对AChR和MuSK抗体的传统检测方法无法检测到自身抗体，称之为血清阴性MG（SN-MG），因此改进已知抗体检测方法或发现新的抗原靶点势在必行。近年来，通过转染细胞法或改进的高灵敏性放射免疫沉淀，已能够在先前的血清阴性MG患者中检测到自身抗体，这包括鉴定LRP4为MG的第三靶抗原，以及传统检测方法无法检测到的AChR和MuSK抗体。此外，在一些MG患者中还发现了针对其他细胞外或细胞内靶点的抗体，如Titin、RyR、Agrin、ColQ、Kv1.4抗体。除了有助于诊断外，确定患者自身抗体特异性对于抗体亚组分类也很重要，因为不同亚组在临床表现、预后以及治疗反应方面可能存在差异。了解MG自身抗体谱将有助于制定针对MG亚组的治疗策略。随着抗原特异性免疫疗法不断取得进展，这种疗法仅针对参与自身免疫反应的特定自身抗体或免疫细胞，这一点变得尤为重要，如抗原特异性免疫吸附已显示出良好的治疗前景。本文回顾了更灵敏的MG自身抗体检测方法、鉴定MG新抗体靶点方面所取得的进展，并讨论它们在MG诊断和治疗中的意义。总体而言，新型自身抗体检测方法的发展有助于更准确地诊断和分类MG患者，支持先进治疗方法的开发，并最终改善疾病管理和患者生活质量。
MG自身抗体及检测
重症肌无力（MG）在临床表现和病理生理学方面都具有异质性。症状上，可表现为局部或全身无力；病理生理上，不同的神经肌肉接头抗原都可能成为攻击目标。症状通常最初出现在眼部肌肉；部分患者的症状仅局限于此（眼肌型重症肌无力，OMG），而大多数患者会在几年内症状进展至其他骨骼肌（全身型重症肌无力，GMG）。该疾病的发病率有两个高峰，分别在50岁以下和50岁以上，分别称为早发型重症肌无力（EOMG）、晚发型重症肌无力（LOMG）。尽管重症肌无力（MG）是一种罕见疾病，患病率为（150-300人）/百万，年发病率约为10人/百万，但它被视为一种典型的抗体介导的自身免疫性疾病，因为在大多数情况下，其自身抗体和靶抗原都已得到充分研究。大多数患者（约85%）体内存在AChR抗体。此外，约6%的患者体内可检测到MuSK抗体，而相对较新的研究发现，约2%的MG患者体内存在LRP4抗体。将这些抗体注入实验动物后引发的被动转移实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG），以及血浆置换后患者症状的改善，都证明了这些自身抗体的致病性。有些患者体内检测不到针对上述任何一种抗原的抗体，这类患者被称为血清阴性（SNMG）患者。在一些MG患者体内还发现了针对其他多种细胞外或细胞内靶点的抗体。尽管这些抗体的致病性往往不明确或可能性较低，但它们仍有可能是极有价值的疾病生物标志物。关于不同重症肌无力（MG）自身抗体的观察结果总结在表1。
表1 MG自身抗体出现概率、常见检测方法和主要临床相关性总结
RIPA，放射免疫沉淀法；CBA，转染细胞法；IP，免疫沉淀法；SDS-PAGE，聚丙烯酰胺凝胶电泳；EOMG，早发型眼肌型重症肌无力；LOMG，晚发型眼肌型重症肌无力；ALS，肌萎缩侧索硬化；乙酰胆碱酯酶（AChE）是一种位于神经肌肉接头突触间隙的酶，它催化乙酰胆碱的分解，从而终止乙酰胆碱对乙酰胆碱受体（AChR）的作用。据报道，5%-50%的MG患者体内存在抗AChE抗体。抗AChE抗体与患者的性别、发病年龄或胸腺病理均无明显相关性。AChE抗体并非MG所特有，在其他一些自身免疫性疾病患者中也能检测到。ColQ存在于神经肌肉接头的细胞外基质中，可能通过与MuSK相互作用，介导乙酰胆碱酯酶的锚定。最近，通过转染细胞法发现，3% MG患者体内存在抗ColQ抗体，其中包括一些血清阴性的MG（SNMG）患者，不过在该研究的对照组中也有相似比例的人存在这种抗体。目前，抗ColQ 抗体的致病性尚未得到确定，因此，其诊断价值和潜在的致病作用仍有待研究。AChR抗体阳性的MG患者中，7.1%的患者检测出抗collagen XIII抗体，在血清阴性的MG患者血清中这一比例为 15.8%。有或无collagen XIII抗体的MG患者在症状表现上并无明显差异。此外，这些抗体并非MG所特有，还与Grave’s眼病有关。
图2 新型检测方法在血清阴性重症肌无力（SNMG）患者中检测自身抗体的情况；展示了在一个欧洲队列中，使用文中所述的新型检测方法（放射免疫沉淀法、转染细胞法），在SN-MG（AChR、MuSK抗体检测呈阴性的MG）患者中检测到自身抗体的百分比。
使用转染细胞法（CBA）和放射免疫沉淀法（RIPA），对大量采用传统检测方法未检测出自身抗体的重症肌无力（MG）患者，以及来自10 - 13个不同欧洲国家的健康个体或患有其他神经免疫疾病（OND）患者的多个对照样本进行了筛查。条形图上方的数字表示每种检测方法的阳性样本数和总检测样本数。为避免高估新出现的血清阳性患者总数，已将 SNMG样本中多种检测方法均呈阳性的新阳性样本的累积百分比以黑色条形图表示。
MG自身抗体相关性治疗
除了具有诊断价值外，确定自身抗体的特异性对于MG患者的正确管理也至关重要。首先，检测血清中的自身抗体，尤其是在检测AChR抗体和MuSK抗体的情况下，能够为MG提供一种几乎可以确定的诊断依据，从而可以开始进行适当的治疗。重要的是，不同的MG亚组患者的治疗方案可能有所不同。MuSK抗体阳性MG患者往往症状更严重，且存在全身性肌无力，而且对于这些患者来说，停止治疗常常会导致病情恶化。此外，当使用溴吡斯的明治疗时，MuSK抗体阳性的MG（MuSK-MG）患者可能会出现不良反应，同时几乎没有证据支持胸腺切除术对这些患者有用。另一方面，他们通常能从血浆置换中获益良多，并且他们对利妥昔单抗的治疗反应非常好，可能比其他MG亚组患者更为明显。同时携带AChR抗体、Titin或RyR抗体的患者，病情往往更为严重，而对于早发型重症肌无力（EOMG）患者来说，这些抗体的存在提示可能患有胸腺瘤。对于血清阴性重症肌无力（SNMG）、MuSK抗体阳性的MG（MuSK-MG）和LRP4抗体阳性的MG（LRP4-MG）患者而言，胸腺切除术的益处存在疑问，因为他们通常不存在AChR抗体阳性的MG（AChR - MG）患者中常见的典型胸腺病理变化。尤其是在日本患者中，Kv1.4抗体的存在与心脏功能障碍和严重并发症相关，因此应该对这些患者进行相应的监测。所以，重要的是不仅要基于临床和电生理检查来诊断患者，还需要进行血清学检测。检测每位患者所针对的自身抗原，对于选择最佳的治疗方案至关重要。结论
血清自身抗体检测是重症肌无力诊断的核心。重症肌无力的发病机制、临床表现以及患者对治疗的反应会因检测出的自身抗体模式不同而有所差异。抗AChR抗体和抗MuSK抗体对重症肌无力具有极高的特异性，是主要的抗原。目前，它们已成功应用于临床疑似重症肌无力病例的早期诊断，其应用具有合理性。尽管放射免疫沉淀法（RIPA）需要使用放射性物质，因此需要专业实验室来操作，但该方法能提供非常灵敏的结果和可靠的抗体滴度信息。有一部分重症肌无力患者血清检测始终呈阴性，但由于自身免疫性重症肌无力很可能在所有患者中都是由自身抗体介导的，所以血清阴性的重症肌无力患者体内可能存在尚未识别的靶蛋白抗体，或者存在针对已知抗原的低亲和力或低浓度抗体，这就需要采用不同的诊断检测方法。因此，开发针对已知抗原的更灵敏检测方法，以及发现和验证新的自身抗体，是十分必要的。为此，人们在改进检测方法方面付出了巨大努力。针对聚集型AChR、MuSK、LRP4的转染细胞法（CBA），都极大降低了血清阴性重症肌无力（SNMG）患者的比例，因此越来越多地被用于重症肌无力自身抗体检测的常规诊断中。
参考文献
Lazaridis K, Tzartos SJ. Autoantibody Specificities in Myasthenia Gravis; Implications for Improved Diagnostics and Therapeutics. Front Immunol. 2020 Feb 14;11:212. doi: 10.3389/fimmu.2020.00212.
