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重症肌无力（MG）是一种自身免疫性疾病，由靶向神经肌肉接头处不同蛋白质的抗体（Ab）引起。当临床上怀疑MG时，抗体检测可以确认诊断，并为患者分组和个性化治疗提供依据。放射免疫测定法（RIA）可在80%-85%的MG患者中检测到AChR抗体，在5%-7%的MG患者体内检测到MuSK抗体。大约10%-15%的MG患者没有通过RIA检测到的抗体，被称为双血清阴性MG（RIA-dSN-MG），但是Live CBA可以在一定比例的这些患者中检测到对AChR抗体或MuSK的抗体。使用转染的人胚肾HEK293细胞在细胞表面过表达AChR或MuSK的Live CBA，不仅被证明比RIA更敏感，而且具有高度特异性。

背景和目标

方法

通过Live CBA和Fixed CBA检测中检测AChR抗体和MuSK抗体，样本在来自2个意大利MG转诊中心的292份血清样本：192份来自MG患者，100份来自对照组。所有样本先前均经RIA评估：66份AChR抗体阳性，40份MuSK抗体阳性，86份血清双抗体阴性MG，所有对照均为阴性。两名独立评估者对CBA结果进行了评估，将Fixed CBA和Live CBA用McNemar test进行比较；采用Cohen’s kappa或组内相关系数(ICC)评估研究者间和实验室间的一致性。

结果

在86份RIA-dSN-MG样本中，Fixed CBA检测到10例抗体（11.6%，95% CI 5.7-20.3），而Live CBA检测出16例抗体，（18.6%，95% CI11.0-28.5）（p=0.0143）。在这些血清中，Fixed CBA阳性者，Live CBA也阳性。另外，Live CBA可以在4个Fixed CBA阴性的样本中检测到MuSK抗体，在2个Fixed CBA阴性样本中检测出AChR抗体，Live CBA抗体检测率进一步提高8%（95% CI 2.9-16.6）。流式细胞术验证了这些结果。在RIA阳性队列中，Fixed CBA对AChR抗体的敏感性为98.5%（95% CI 91.9-99.9），Live CBA对其敏感性为100%（95% CI 94.6-100）（p=0.1573）。对于这两种检测方法，MuSK抗体的敏感性为100%（95% CI 91.2-100），特异性为100%（95% CI 96.4-100）。对于Live CBA和Fixed CBA（Cohen’s kappa分别为0.972和0.978），评估者之间的分数几乎一致，类似于实验室间一致性。

在RIA-dSN-MG患者（n=86）中，86例中有10例Fixed CB检测到抗体（11.6%，95% CI 5.7-20.3，图1，A-C），86例样本中有16例Live CBA检测到（18.6%，95% CI 11.0-28.5；图1，D-L）（p=0.0143）。

（A）Fixed CBA阴性；（B）Fixed CBA检测成人AChR抗体弱阳性；（C）Fixed CBA检测MuSK抗体阳性；（D-F）Live CBA检测成人AChR抗体；（G–I）Live CBA检测MuSK抗体；在用成年AChR（J）转染的eGFP标记的活细胞上测试健康对照样本显示没有结合（K），没有信号共定位（L）。

讨论

我们的研究结果证实，活的和固定的CBA在RIA阳性患者中都能产生高灵敏度和极好的特异性，与之前的结果一致。在RIA-dSN-MG中，Live CBA可以在一定比例的患者中检测AChR抗体和MuSK抗体。这与之前的报告一致，包括我们小组最近的一项研究，它反映了高敏感性的检测方法（Live CBA）的使用，该检测方法也可以检测低亲和力抗体。最近，AChR抗体和MuSK抗体的商业化Fixed CBA已经上市，到目前为止，只有一项研究评估了其性能，报告称与RIA相比，AChR抗体阳性率增加了4%。我们的比较研究发现，这些CBA的表现并不相同，在检测MuSK抗体和AChR抗体方面，Live CBA比Fixed CBA更敏感（p=0.0143）。事实上，8%的RIA和Fixed CBA阴性样本通过Live CBA检测呈阳性。根据这些发现，Fixed CBA检测阴性的样本应转诊至专业中心进行Live CBA检测（MG血清学诊断流程如图2所示）。

对于重症肌无力患者AChR抗体和MuSK抗体的检测，商业化Fixed CBA是RIA的一种有价值的替代方法，而且Live CBA可用于RIA和Fixed CBA检测阴性样本的进一步血清学检测。

拓展阅读

重症肌无力精准诊断策略

参考文献