✦+ 点击上方蓝字 关注我们 目的 描述与淋巴瘤相关的小脑综合征患者中，G蛋白信号调节因子8（RGS8）作为自身抗体靶点的鉴定。 方法 对小脑浦肯野细胞具有非常相似反应的4名患者血清用于抗原鉴定实验。用小脑裂解物进行免疫沉淀，用质谱分析鉴定了自身抗原，然后通过免疫荧光法、免疫印迹法和ELISA进行了验证。 对照组包括152份健康供体的血清和20份有神经症状但小脑组织切片无荧光反应的患者的脑脊液。其…

✦+

点击上方蓝字 关注我们

目的

描述与淋巴瘤相关的小脑综合征患者中，G蛋白信号调节因子8（RGS8）作为自身抗体靶点的鉴定。

方法

对小脑浦肯野细胞具有非常相似反应的4名患者血清用于抗原鉴定实验。用小脑裂解物进行免疫沉淀，用质谱分析鉴定了自身抗原，然后通过免疫荧光法、免疫印迹法和ELISA进行了验证。对照组包括152份健康供体的血清和20份有神经症状但小脑组织切片无荧光反应的患者的脑脊液。其他对照组包括350份来自肿瘤患者的样本，包括66份肺癌患者血清，10份宫颈癌患者血清，83份乳腺癌患者血清，8份卵巢癌患者血清，26份前列腺癌患者血清，24份来自霍奇金淋巴瘤患者，和133份来自非霍奇金淋巴瘤患者。

结果

4名患者的血清和脑脊液在小脑浦肯野细胞和分子层有染色。4份血清中，RGS8被鉴定为靶抗原。在中和实验中，重组人RGS8能够中和自身抗体的组织反应。患者血清和CSF在ELISA和免疫印迹法中对重组RGS8有特异性反应，而在对照组中没有这种反应。4名患者中，有2名患者有临床资料，均明显表现为小脑综合征并伴有胃B细胞淋巴瘤（患者1，53岁）或霍奇金淋巴瘤（患者2，74岁）。
患者临床特征
患者1一名53岁的男子报告说，他突然出现了单词检索困难，右手的精细运动技能出现了功能障碍。在4周内，观察到行走不稳和说话不清的增加。神经系统检查提示小脑综合征，伴有明显的构音障碍、超量扫视、步态和站立不稳、上肢轻度共济失调和两侧下肢严重共济失调。脑部MRI正常，具体表现为无小脑或脑干萎缩。神经生理检查显示除双侧腕管综合征外，无其他多发性神经病或神经压迫综合征的迹象。发病4周后，脑脊液分析显示血脑脊液屏障功能完整，但慢性炎症变化特征为淋巴细胞性白细胞增多症（8/μL；正常<5/μL）、蛋白质水平轻微升高（52.3mg/dL；正常<45mg/dL）和脑脊液特异性寡克隆区带。
通过胸部和腹部的CT扫描、食管胃镜检查、腹部超声和结肠镜检查来寻找肿瘤，并没有发现潜在的肿瘤。然而，患者当时患有严重胃溃疡，没有足够的恶性肿瘤免疫组化征象。腹腔镜胃窦切除术4周后发现胃窦高度恶性B细胞淋巴瘤。
在检测肿瘤并拟诊副肿瘤小脑炎后，静脉注射免疫球蛋白治疗（IVIG；30g/d，5天），联合泼尼松龙2×50mg/天。在开始IVIG治疗4天后，观察到构音障碍和意向性震颤的轻度改善，以及步态共济失调的明显改善。之后，病情再次恶化。10周后，患者再次接受共120g IVIG治疗5天。同时接受利妥昔单抗、环磷酰胺、阿霉素、R-CHOP化疗（每2周）治疗肿瘤。小脑综合征发作4年后的临床随访中，尽管肢体和步态共济失调持续存在，但患者的全身和神经系统状况明显改善。B细胞淋巴瘤已被成功治疗且没有复发。小脑组织的间接免疫荧光法中不再检测到抗浦肯野细胞抗体。
患者2一名74岁的女性，表现为快速进行性小脑综合征。她报告说，在大约8周的时间里，她在步态、言语、姿势和上肢协调方面的障碍持续增加。在形式上，她仍然能走路，但需要一个助行器。神经系统检查显示严重的小脑综合征，主要为构音障碍和四肢共济失调，以及站立甚至坐姿时的姿势不稳定。
脑核磁共振扫描显示相当轻的脑白质疏松的迹象，没有影响脑干，且是唯一的病理发现。诊断4个月后，脑部MRI扫描显示小脑持续萎缩(图e1)。脑脊液显示血脑屏障功能障碍，IgG指数升高，24.2%的鞘内合成和寡克隆区带阳性，但没有急性炎症的迹象。没有任何感染病的证据。进一步体检在右腋窝有一个增大淋巴结，进行活检后诊断为霍奇金病。
图e-1。患者2：轴位（A和B）；矢状（C和D）；诊断时（A和C）；四个月后（B和D）；脑部MRI显示小脑进行性萎缩。
最初，采用静脉注射免疫球蛋白治疗（IVIG；30g，超过5天）。此外，患者接受了2个周期的ABVD化疗方案，每个周期联合地塞米松16mg/天，然后放疗。最终肿瘤完全缓解。治疗一开始就导致了小脑症状的一些改善。然而，在诊断后10个月，观察到共济失调症状明显进展。患者只能走几步，容易跌倒，需要使用轮椅。5天的免疫吸附未达到任何明显作用。在随访期间，尽管肿瘤有所缓解，但仍未从小脑综合征中恢复。
自身抗体的临床特征

图1A和表e-1 所有4名患者的血清和脑脊液，均采用间接免疫荧光法，在大鼠小脑和猴小脑冰冻组织切片的浦肯野细胞和分子层显示出类似染色。图1B 在小鼠全脑的矢状切面上，观察到患者自身抗体对小脑（不包括大脑的其他部分）的主要荧光反应。
RGS8靶抗原的鉴定 图2 免疫沉淀和抗原鉴定大鼠小脑裂解液与患者血清或对照组血清一起孵育。免疫复合物被蛋白G包被的磁珠富集，SDS缓冲液洗脱，然后进行SDS-PAGE分析。考马斯染色（左）；免疫印迹法（1:200）（右）。箭头表示免疫沉淀抗原在25kDa左右的位置，经MALDI-TOF MS鉴定为RGS8。 

图3 重组RGS8在小脑组织的中和反应将患者血清（1:32）与RGS8转染的HEK293细胞裂解液的1:10稀释提取物或空白载体作为对照进行预培养。含有RGS8转染的HEK293裂解液提取物可消除免疫反应。细胞核用TO-PRO-3碘化物复染（蓝色）（100 μm）。 

图e-2 抗Yo、抗DNER或抗NCDN抗体阳性的血清反应不受含有RGS8转染的HEK293裂解液提取物的影响 图4 不同免疫分析法检测患者血清和脑脊液中的RGS8抗体（A）免疫印迹法：用RGS8转染的HEK293细胞裂解液与1:200稀释的患者或对照血清以及抗His抗体。（B）Euroline：患者（PS1、PS2、PS3、PS4）或对照血清（CS）（1:100）。（C）ELISA：纯化的重组RGS8-His与患者或对照血清（1:100）；患者或对照CSF（1:10）。（D）间接免疫荧光法：患者或对照血清（1:100）与RGS8转染的KEK293细胞。

结论

我们的结果表明，抗RGS8抗体是与淋巴瘤相关的副肿瘤性小脑综合征的新型标志物。

讨论

RGS8是一种细胞膜内表面外周膜蛋白，主要在大脑中表达，尤其是在小脑浦肯野细胞的细胞体和树突中。RGS蛋白参与调节多种中枢神经系统活动，包括突触可塑性、记忆和视觉。对于RGS8，已经提出了调节神经元兴奋性和神经突起生长的功能。
未来的研究需要阐明RGS8蛋白在淋巴瘤或其他类型癌症中的表达，并鉴定抗RGS8抗体识别表位。此外，还需要确定抗RGS8抗体在小脑综合征和其他神经系统疾病患者中的患病率，以进一步证明该生物标志物的特异性。
参考文献Miske R, et al.Autoantibodies Against the Purkinje Cell Protein RGS8 in Paraneoplastic Cerebellar Syndrome. Neurol Neuroimmunol Neuroinflamm. 2021 Mar 29;8(3):e987.
✦+

+

HongWang

宏望医学| 客服电话 |400-8700-266