BCR::ABL融合基因是由9号染色体ABL基因与22号染色体BCR基因相互易位形成的致癌基因，其产物具有异常酪氨酸激酶活性及抗细胞凋亡功能，导致细胞增殖失控与存活异常。该融合基因是慢性粒细胞白血病（CML）、急性淋巴细胞白血病（ALL）、急性髓系白血病（AML）以及一些其他血液肿瘤的标志性靶标，在血液疾病的诊断分型与靶向治疗中起重要作用。ABL1激酶区突变是导致TKI靶向药耐药、治疗失败的主要原因，早检测、及时调整治疗方案是改善预后的关键。

本专利公开了BCR::ABL1融合基因定量及ABL1激酶区热点突变同步检测的引物组合、试剂盒及方法，基于RT-PCR+毛细管电泳整合的检测策略，通过优化引物设计和检测流程，解决了现有技术检测通量低、操作繁琐、成本高昂等问题，可同时识别包括BCR::ABL1 p190、p210、p230及罕见型在内的13种融合亚型，并覆盖ABL1激酶区90%以上临床相关耐药突变位点，具有一体化检测流程、特异性强、检测灵敏度高、快速高效等多项技术优势，特别适合临床推广应用。

慢性粒细胞白血病（CML）、部分急性淋系细胞白血病（ALL）以及部分急性髓系白血病（AML）携带BCR::ABL1融合基因，导致细胞疯狂增殖且不再凋亡。酪氨酸激酶抑制剂（TKI，如伊马替尼、尼洛替尼等）通过靶向抑制BCR::ABL1激酶活性，已成为携带BCR::ABL1融合基因患者治疗方案的重要组成，可以显著延长患者生存期。然而，约20～30%的患者因ABL1激酶区获得性突变（如p.T315I、p.G250E、p.Y253H等）而产生对第一代和/或第二代TKI耐药，导致治疗失败或疾病进展。因此，同时检测BCR::ABL1融合基因表达及ABL1激酶区突变状态，是指导TKI药物选择、优化治疗方案及预测预后的关键环节。临床亟需同步检测BCR::ABL1融合基因表达水平及ABL1激酶区突变状态，以指导精准用药。

现有的检测方法主要有RT-PCR、qPCR、ARMS-PCR、数字PCR、Sanger测序、NGS等，虽然已经在BCR::ABL1融合基因以及ABL1激酶区突变检测临床实践中有较长时间的应用，但是通过对现有技术的分析可以发现，当前检测方法仍然存在以下局限性：

综上所述，现有技术尚缺乏一种高灵敏度（≤1%）、低成本、一体化的检测方案，能够同时实现BCR-ABL1融合基因定量和ABL1激酶区多突变筛查，以满足临床精准诊疗和耐药监测的迫切需求。

技术突破：2管PCR搞定13种融合亚型+90%以上耐药突变

宏望医学本次授权专利，基于RT-PCR+毛细管电泳创新整合策略，最大限度的减少多重PCR扩增过程中非特异性片段的产生，并加入可以野生型模板的Blocker探针，实现一体化、高通量、高灵敏同步检测，相比现有其他技术，具有以下优势：

• 覆盖超全面：一次性检测13种BCR::ABL1融合亚型+主要ABL1激酶区耐药突变，覆盖90%以上临床相关耐药位点，不漏诊、不误判；

• 灵敏度行业领先：突变检出限低至0.1%，比传统Sanger测序灵敏度提升100–200倍，极微量突变也能精准捕捉；

• 特异性高、判读准确：筛选最优的特异性引物以及各突变位点合适的blocker探针，无明显的非特异性峰，结果易判读；

• 流程极简、成本大降：仅需2管多重PCR，操作强度降低10倍，1–2天即可出报告，大幅缩短患者等待时间；

• 适配基层、易推广：无需昂贵NGS平台，常规毛细管电泳即可开展，设备门槛低、数据分析简单，适合各级医院普及。

可稳定检出频率低至0.1%的T315I突变