摘要 背景： 自身抗体是早期检测和诊断自身免疫性小脑性共济失调（ACA）的重要生物标志物。 目的： 鉴定ACA患者中的新型自身抗体 候选 。 方法： 招募2018年7月至2023年2月，北京协和医院病因不明的小脑性共济失调患者，通过基于组织的间接免疫荧光法（TBA）检测血清抗神经抗体。对TBA阳性但已知抗体阴性的样本，采用组织免疫沉淀（TIP）、质谱分析（MS）筛选目标抗原，并通过中和实验、转染细…

摘要

背景：自身抗体是早期检测和诊断自身免疫性小脑性共济失调（ACA）的重要生物标志物。目的：鉴定ACA患者中的新型自身抗体候选。方法：招募2018年7月至2023年2月，北京协和医院病因不明的小脑性共济失调患者，通过基于组织的间接免疫荧光法（TBA）检测血清抗神经抗体。对TBA阳性但已知抗体阴性的样本，采用组织免疫沉淀（TIP）、质谱分析（MS）筛选目标抗原，并通过中和实验、转染细胞法（CBA）和免疫印迹法（BLOT）验证抗体与抗原的特异性结合。结果：在1例43岁女性患者中首次发现抗EEF1D抗体，并在后续筛查中确认第2例59岁女性患者阳性。两名患者均表现为步态不稳、运动性共济失调等小脑综合征，接受糖皮质激素、静脉注射免疫球蛋白、吗替麦考酚酯治疗后症状改善，但治疗前已出现的小脑萎缩可能不可逆。结论：本研究首次报道抗EEF1D抗体为ACA的新型自身抗体候选，其病理作用和诊断价值需进一步大样本验证。

自身免疫性小脑性共济失调（ACA）是散发性小脑综合征的重要病因，可导致严重残疾，但也是一种潜在可治疗的疾病。通过免疫治疗，患者可能获得康复。自身抗体是早期检测和诊断ACA的重要生物标志物。
过去十年中，已发现数十种ACA相关自身抗体。一些特征明确的抗体（如抗Yo、Hu、CV2、Ri、Ma2 和 KLHL11 抗体）被视为副肿瘤性小脑变性（PCD）的病因线索，而近期报道的许多抗体（如抗PED10A、AP3B2、RGS8和 Septin-5抗体）的病理作用尚未完全明确。尽管大多数ACA抗体罕见且被认为是非致病性的，但相当比例的抗体阳性患者对免疫治疗有反应。尽管已鉴定出大量ACA相关自身抗原，但仍有许多ACA患者的血清学特征无法匹配任何已知抗原，这限制了诊断和治疗的可能性。本研究中，我们在两名ACA患者样本中检测到新型自身抗体候选，并鉴定EEF1D为靶抗原。

样本和方法

招募2018年7月至2023年2月，北京协和医院病因不明的小脑性共济失调患者，通过基于组织的间接免疫荧光法（TBA）检测血清抗神经抗体。对TBA阳性但已知抗体阴性的样本，采用组织免疫沉淀（TIP）、质谱分析（MS）筛选目标抗原，并通过中和实验、转染细胞法（CBA）和免疫印迹法（BLOT）验证抗体与抗原的特异性结合。
实验组：筛查抗体包括抗MOG、AQP4、NMDAR、CASPR2、AMPAR、LGI1、GABABR、GAD65、ITPR1、ZiC4、PKCγ、AP3B2、PCA-2、CARP VIII、Homer-3、NCDN、CV2/CRMP5、PNMA2 (Ma2)、Ri、Yo、Hu 和 Amphiphysin抗体。共有38例患者上述抗体CBA均为阴性，TBA阳性。对照组：纳入15例无神经系统表现的系统性自身免疫性疾病患者（年龄和性别匹配）及30名健康对照。38例患者和3名健康对照的血清样本进行TIP联合MS。所有受试者的血清样本均通过CBA检测抗EEF1D抗体。其中，2018年7月至2019年11月，共招募5例已知神经抗体阴性的ACA患者。

结果

其中在2018年7月至2019年11月期间，招募了5例已知神经抗体阴性的ACA患者，其中1例在前期研究中被鉴定为抗 Rab6a/b抗体阳性。包括本研究病例1在内的其余4例患者的血清和脑脊液样本用于进一步抗原鉴定。病例1的血清和脑脊液在大鼠小脑神经元胞体染色中呈现特异性IgG免疫荧光模式，尤其在浦肯野细胞层和分子层（图 1A）。该自身抗体的IgG亚类包括 IgG1、IgG2 和 IgG3（图 1B）。通过质谱分析确定为候选自身抗原。
在1例43岁女性患者中首次发现抗EEF1D抗体，并在后续筛查中确认第2例59岁女性患者阳性。两名患者均表现为步态不稳、运动性共济失调等小脑综合征，接受糖皮质激素、静脉注射免疫球蛋白、吗替麦考酚酯治疗后症状改善，但治疗前已出现的小脑萎缩可能不可逆。

图1 大鼠小脑的IgG免疫荧光染色A. 大鼠脑组织切片染色：病例1患者的血清（1:400稀释）和脑脊液（1:40稀释）、对照血清（1:40稀释）。在浦肯野细胞层和分子层均观察到清晰的IgG染色（绿色）。细胞核用DAPI（蓝色）标记。B. 该自身抗体包括IgG1、IgG2和IgG3亚类，但不包括IgG4。

图2 自身抗体与人类全长EEF1D特异性结合A. 病例1和病例2患者的血清（1:20稀释）与重组人EEF1D蛋白发生反应，但健康对照无反应。上半部分为化学发光检测结果，下半部分为Coomassie染色。B. 病例1患者血清与大鼠小脑组织切片特异性结合，绿色荧光；抗EEF1D抗体与大鼠小脑组织切片特异性结合，红色荧光。合并图像显示同一区域的共定位荧光（黄色），细胞核用DAPI（蓝色）标记。C. 用重组人EEF1D蛋白预孵育后，病例1患者样本的荧光染色被消除。

图 3 抗EEF1D抗体阳性患者（病例1）的脑部磁共振成像（MRI）A. 疾病发作两个月后（2019年5月）的MRI显示小脑多发性高信号病变B. 一个月后（2019年6月）的随访MRI显示小脑病灶消失C. 2019年10月的MRI显示小脑萎缩

表 1 两名抗EEF1D抗体阳性患者的临床特征、治疗及预后

CSF：脑脊液；IVIg：静脉注射免疫球蛋白；MMF：吗替麦考酚酯；OB：寡克隆带；WBC：白细胞；（+）：阳性

讨论

抗 EEF1D 抗体的特异性

本研究首次报道抗 EEF1D 抗体与 ACA 相关。通过 TIP-MS 发现该抗体在 38 例已知抗体阴性的 ACA 患者中特异性结合 EEF1D，而健康对照和系统性自身免疫病患者均为阴性。CBA 验证进一步显示抗体与重组人 EEF1D 蛋白的强结合（图 2B），支持其作为新型生物标志物的潜力。EEF1D 的功能与病理意义EEF1D 是翻译延伸复合体的关键成分，参与 tRNA 向核糖体的递送。抗 EEF1D 抗体可能通过干扰翻译过程导致小脑神经元损伤。病例 1 治疗前的 MRI 显示小脑病变（图 3A），而治疗后病变消退但最终发展为萎缩（图 3C），提示抗体介导的急性损伤可能进展为不可逆的结构改变。与已知 ACA 抗体的比较抗 EEF1D 抗体与经典副肿瘤抗体（如抗 Yo、Hu）不同，其阳性患者无肿瘤证据。与近期报道的抗 AP3B2 抗体、抗 RGS8 抗体类似，抗 EEF1D 抗体可能代表非副肿瘤性 ACA 的新亚型。临床特征与治疗反应两名患者均表现为小脑综合征伴周围神经病变（表 1），与文献中其他自身抗体相关 ACA 一致。免疫治疗部分改善症状，但小脑萎缩可能持续进展。这提示早期干预可能阻止不可逆损伤，与抗 GAD-65 抗体相关 ACA 的研究结果一致。研究局限性与展望本研究样本量小（2 例阳性），需扩大队列验证抗体频率和致病性。此外，EEF1D 在小脑的具体功能及其抗体的作用机制（如补体激活或细胞毒性）需进一步研究。未来可通过动物模型探讨抗体对翻译延伸的影响及神经保护策略。
参考文献Guo L, Ren H, Fan S, et al. Autoantibodies against eukaryotic translation elongation factor 1 delta in two patients with autoimmune cerebellar ataxia. Front Immunol. 2024 Jan 25;14:1289175. doi:10.3389/fimmu.2023.1289175.